支原體清除試劑1(1000x)

使用方法

（一）支原體清除試劑 1

1. 使用之前，先將支原體清除試劑1用 PBS或者無血清培養(yǎng)液稀釋10倍后，放 4℃冰箱保存。

2. 將 50-100萬個細胞鋪到 60mm的細胞培養(yǎng)皿內(nèi)，加入4mL含支原體清除試劑1的正常細胞培養(yǎng)液（使用稀釋 10倍后的支原體清除試劑 1，按 1:100 比例加入）。

3. 每 2-3天更換細胞培養(yǎng)液。換液時，用 PBS沖洗 2-3 遍細胞，以將死亡的支原體清洗干凈。而后加入新鮮的含支原體清除試劑1的正常細胞培養(yǎng)液。期間如果細胞密度過大，請保持細胞密度適當（貼壁細胞可能需要yi酶消化），并更換新的培養(yǎng)皿。

4. 處理15天后，可以用支原體檢測試劑盒進行檢測，檢測支原體是否殺滅。如果仍有支原體殘留，可以考慮再處理6天。

5. 以后每隔1個月進行支原體的常規(guī)檢測，以保證沒有新的支原體污染。

l 建議將細胞分成三份：第一份添加清除試劑1，第二份添加清除試劑2，第三份同時添加清除試劑1和清除試劑2進行殺滅（注：同時添加兩種藥物可能對細胞的毒性較大，但是殺滅的概率會非常高）， 這樣支原體對兩種藥物同時產(chǎn)生抗性和處理過程中細胞同時死亡的概率會非常低。如果同時添加清除試劑 1 和清除試劑 2，細胞可以每 2 天更換一次培養(yǎng)液。

l 處理過程中，注意每天觀察細胞的狀況，如果發(fā)現(xiàn)支原體清除試劑對細胞的毒性較大，可以加大培養(yǎng)液中的血清濃度或者提高細胞的密度。

l 清除試劑1和清除試劑2在降低濃度后（使用稀釋10倍后的支原體清除試劑1或者 2，再按 1:500 比例加入，即藥物的最終稀釋比例為 1:5000）也可以加入到培養(yǎng)液中作為短期（1-2個月）的支原體污染預防藥物，但是不建議在細胞培養(yǎng)液中長期（超過2個月）加入，因為有可能導致對該兩種藥物有抗性的支原體出現(xiàn)。